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수돗물 바이러스 정책간담회 – 수돗물바이러스에서의 세포배양법에 관한 의견

수돗물바이러스에서의 세포배양법에 관한 의견

1) BGMK 세포사용의 문제점
(1) BGMK 세포는 일차적으로 enterovirus를 분리하는데 주로 사용되는 세포이지지만 모든 종류
의 enterovirus를 검출할 수가 없음.

(2) Enterovirus 이외의 다른 바이러스 즉 adenovirus를 검출할 경우에는 BGMK 이외의 세포를
사용하여야 함.

2) 대안

(1) BGMK, RD, Graham-293, KB세포를 바이러스 검출 배양세포에 포함시킨다.
위에서 언급된 4개 종류의 세포를 이용한다고 해서 모든 culturable virus를 검출할 수 있는 것
은 아니다. 따라서 enterovirus의 경우 BGMK와 RD 세포를 함께 사용할 경우(최소한 2가지 이상
의 세포를 사용하는 것이 현 추세임) 좀더 많은 종류의 enterovirus를 검출 할 수가 있으리라
생각된다. Adenovirus의 경우 Graham-293 세포와 KB세포를 사용할 경우 다양한 종류의
adenovirus를 검출 할 수 있으리라 생각된다. 추가적으로 언급하면 Graham-293 세포와 KB세포
는 또한 enterovirus의 일부를 검출할 수가 있어 enterovirus의 검출에도 부가적인 효과를 얻
을 수가 있으리라 판단된다.

(2) “위의 세포를 어떻게 이용할 것인가?”에 관한 의견

① 예비실험에 이용한다.
검체를 위의 4가지 세포에 접종하여 어느 세포에서 CPE가 생기는지를 확인 한 후 CPE가 관찰된
세포를 선정하고 선정된 세포를 이용하여 바이러스 정량검사를 시행한다.
예비실험에 관하여 몇 가지 사항을 언급하여 보면 다음과 같다.

가. 시료 일부를 4개의 세포에 중복 접종하고 나머지는 분주하여 냉동보관한다(분주하는 이유
는 세포독성 실험 및 추후 정량검사를 위한 것임).

나. 시료를 접종할 때 흡착과정은 80~120 분이라고 되어 있으나 이것은 BGMK 세포의 경우이므
로 Graham-293, KB 세포의 흡착시간은 실험적인 과정을 거친후에 결정하여야 한다 (예, 음성대
조 물질(바이러스를 용해시킨 용액)을 세포에 넣어 세포가 얼마간 버틸 수 있는 지를 확인 함)

다. 양성대조군 및 사용배지는 각 세포에 적합한 것을 사용한다.

라. 예비실험에서 사용되는 배양기구는 시료량이 적을 경우에는 24-well tissue culture plate
를 사용하여도 괜찮다.

마. 기타 사항은 일반적인 사항에 준 한다.
바. 예비실험에서 모든 세포에서 음성 결과가 나올 경우 추후 단계로 어떻게 하여야 할 것인가
는 따로 정한다
(예, “BGMK 세포만을 이용하여 본 실험으로 진행한다” 등)

** 기타사항 **

1. 세포배양이 안되는 바이러스의 경우
외국에서 어떻게 사용하고 있는지가 참고가 되리라 생각됨.

2. Culture-PCR(culture-RT-PCR)
의견 1) 외국에서의 현황이 참고가 되리라 생각됨.
2) 장바이러스의 경우 inactivation 한 후 불활성화된 바이러스와, 불활성화 안된 바이러스를
세포에 접종하여 RT-PCR을 시행하여 결과를 검토하여 봄이 어떨까 생각 됨.

3. 현재는 배양이 안되지만 배양이 가능한 사실이 문헌에서 밝혀지면 자체 검토를 통하여 배양
세포를 추가하는 방법도 있음.

4. 인증위원회 구성은 공정한 심사를 할 수 있는 사람들로서 구성되어야 한다고 생각 됨. 기타
blind test등은 수돗물 바이러스를 검사하는 모든 기관이 받아야 함.

글 : 이 규 만 (한림대학교 의대)
자료제공 : 환경과 공해연구회

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